Essais de performance en culture cellulaire
Afin de déterminer si le reconditionnement influe sur les propriétés de culture cellulaire des plaques en polystyrène à 6 puits (cuture coated), nous avons évalué trois paramètres : la morphologie cellulaire, la confluence cellulaire et la viabilité cellulaire, en utilisant des fibroblastes Rat-1 comme modèle.
Les plaques ont été soumises à un maximum de cinq cycles de reconditionnement. Après chaque cycle, deux plaques ont été mises de côté, et les plaques restantes ont été réensemencées puis renvoyées pour reconditionnement. Une fois tous les cycles terminés, toutes les plaques (y compris deux plaques neuves servant de témoins) ont été ensemencées simultanément à partir de la même culture cellulaire afin de minimiser la variabilité et de permettre une comparaison directe.
La confluence et la morphologie ont été évaluées par microscopie à contraste de phase à des grossissements de 4x et 40x. La confluence a été quantifiée à partir d’images à 4x à l’aide du logiciel ImageJ, tandis que la morphologie a été analysée à partir d’images anonymisées à 40x en mesurant la surface cellulaire, le rapport largeur/hauteur et le diamètre de Feret sur 10 cellules sélectionnées au hasard par image. La viabilité cellulaire a été mesurée à l’aide d’un test d’exclusion au bleu de Trypan avec un compteur cellulaire automatisé, sur deux réplicats par plaque.
Pour connaître la méthodologie complète, consultez notre étude : Mansouri et al., 2026 — npj Materials Sustainability
Des tests similaires ont également été réalisés sur des flasques T-75, des boîtes de Pétri et des plaques à 12 puits (toutes culture coated).
Résultats de l’ensemencement de Rat-1 fidans des plaques neuves et reconditionnées (jusqu’à 5 fois) plaques.
Résultats
Les plaques reconditionnées ont permis une croissance cellulaire comparable à celle observée sur les plaques neuves pour l’ensemble des paramètres mesurés. La viabilité cellulaire s’élevait en moyenne à 93 % sur les plaques neuves et variait entre 81 % et 98 % au cours des cycles de reconditionnement. La confluence s’élevait en moyenne à 87 % sur les plaques neuves et à 83–93 % sur les plaques reconditionnées. La surface cellulaire individuelle s’élevait en moyenne à 889 μm² dans les plaques neuves et à 798–898 μm² dans les plaques reconditionnées, tandis que les rapports largeur/hauteur étaient pratiquement identiques entre les deux conditions. Les images microscopiques n’ont révélé aucune différence apparente dans la morphologie ou la répartition des cellules entre les plaques neuves et celles reconditionnées jusqu’à cinq fois. Aucune différence statistiquement significative n’a été observée pour aucun de ces paramètres.
La variabilité était similaire tant pour les plaques neuves que pour les plaques reconditionnées, et n’a pas remis en cause la conclusion générale : le processus de reconditionnement n’a pas eu d’impact significatif sur les performances de la surface des plaques. Notre procédé permet donc d’utiliser des consommables reconditionnés jusqu’à cinq fois pour le passage et l’ensemencement de cellules. Veuillez noter que cette conclusion s’applique aux consommables ayant subi un traitement de surface chimique (type culture coated), et non à ceux ceux ayant subi un traitement de surface biologique, tels que les consommables recouverts de collagène.
Ces résultats concordent avec ceux de recherches antérieures. Trusler et al. ont montré que la réutilisation des Pétri de culture au cours de plusieurs passages n’avait aucune incidence sur la morphologie, la prolifération ou la viabilité des fibroblastes pulmonaires humains ( Front. Sustain., 2024). De même, Clancy et al. ont rapporté que la réutilisation de Pétri de culture dans le cadre d’expériences sur des embryons de Xenopus laevis donnait des taux de fécondation et de survie comparables à ceux obtenus avec des Pétri neufs (Differentiation, 2023). Pris dans leur ensemble, ces résultats confirment la faisabilité du reconditionnement du matériel de laboratoire à usage unique sans compromettre la fiabilité des expériences.