Quantification des protéines pour une large gamme de concentrations
Le potentiel de réutilisation des tubes dans des applications liées aux protéines a été évalué à l’aide de dosages quantitatifs de protéines sur une large plage de concentrations, allant de 0,5 à 2 000 μg/mL. Différentes concentrations et différentes méthodes de détection ont été étudiés afin d’évaluer les performances tant à de faibles qu’à de fortes concentrations en protéines.
Les résultats présentés ici comprennent :
- Dosage Pierce BCA dans des tubes de microcentrifugeuse : 25 à 2 000 μg/mL
- Dosage Pierce BCA dans des microplaques : 5 à 250 μg/mL
- Test de fluorescence AccuOrange dans des tubes de microcentrifugeuse : 0,5 à 1 μg/mL
Microplaques et tubes reconditionnés pour le dosage des protéines par la méthode BCA de Pierce
Afin de déterminer si le reconditionnement influe sur la précision de la quantification des protéines, nous avons réalisé le test BCA de Pierce selon deux méthodes : une méthode sur microplaque (plaques en polystyrène à 96 puits) et une méthode sur tube (tubes de microcentrifugation en polypropylène de 1,5 ml).
Trois microplaques et 18 tubes ont été soumis à cinq cycles de reconditionnement et réutilisés pour réaliser le dosage après chaque cycle, en comparaison avec des consommables neufs à chaque cycle. Les deux formats ont suivi les protocoles BCA standard, avec 9 étalons de concentration et un blanc à l’eau Milli-Q pour chaque condition (de 5 à 250 μg/mL pour les plaques, et de 25 à 2 000 μg/mL pour les tubes). L’absorbance a été mesurée à 562 nm, et des courbes étalons ont été établies pour chaque condition. L’absorbance du blanc, l’absorbance des courbes étalons et les écarts-types ont été comparés entre les consommables neufs et reconditionnés afin d’évaluer tout effet sur la précision et la variabilité des mesures.
Pour connaître la méthodologie complète, consultez notre étude : Mansouri et al., 2026 — npj Materials Sustainability
Quantification des protéines dans des microplaques à 96 puits et des micro-tubes à l’aide du test BCA. L’analyse statistique a été réalisée à l’aide de la méthode de Mann–Whitney U avec correction de Bonferroni-Holm. Aucune différence statistiquement significativen’a été observée. Chaque étalon a été testé en 5 réplicats par plaque pour les microplaques et en trois réplicats pour les tubes (soit un total de 18 tubes).
Résultats
Les microplaques et les tubes reconditionnés ont permis d’obtenir des courbes étalons comparables à celles obtenues avec des consommables neufs, et ce, sur l’ensemble des cycles de reconditionnement. Pour les tubes, les valeurs de R² sont restées systématiquement supérieures à 0.99, tant pour les tubes neufs que pour les tubes reconditionnés, et aucune différence statistiquement significative n’a été détectée au niveau de l’absorbance pour aucun des étalons. L’absorbance à blanc des tubes reconditionnés était légèrement supérieure à celle des tubes neufs (d’environ 0.003 unité d’absorbance), mais cette différence n’était pas statistiquement significative. Pour les microplaques, les valeurs de R² sont restées supérieures à 0.97 dans toutes les conditions, et aucune différence statistiquement significative n’a été détectée au niveau de l’absorbance pour aucun des étalons.
Les tailles d’effet et les écarts-types ont légèrement varié d’un étalon à l’autre et d’une répétition à l’autre dans les deux formats, mais n’ont pas montré de tendance constante en faveur de l’un ou l’autre groupe, ce qui suggère que la variation observée reflète des facteurs expérimentaux normaux, tels que la préparation des étalons, leur manipulation ou le moment de la mesure, plutôt qu’un quelconque effet du reconditionnement.
Ces résultats confirment que les microplaques et les tubes de microcentrifugeuse peuvent être réutilisés en toute sécurité pour la quantification des protéines, sans perte de précision ni de fiabilité, et ce, sur cinq cycles de reconditionnement.
Quantification des protéines par dosage fluorimétrique
Afin de déterminer si le reconditionnement influe sur la précision de la quantification de faibles concentration de protéines, nous avons réalisé des dosages fluorimétriques de la protéine BSA (Bovine Serum Albumin) avec le kit AccuOrange (Biotium) sur des tubes de microcentrifugation en polypropylène de 1,5 mL.
Des tubes de microcentrifugation ont été soumis à un cycle de reconditionnement puis réutilisés pour réaliser les dosages, en comparaison avec des consommables neufs, pour trois marques (M1 Invitrogen Low-binding, M2 Corning, M3 FunChem). Cette expérience a suivi le protocole standard, avec 5 étalons de concentration et un blanc à l’eau Milli-Q dans chaque condition. Chaque condition a été mesurée en trois réplicats. Les valeurs de fluorescence des courbes d’étalonnage et les coefficients de variation ont été comparés entre consommables neufs et reconditionnés afin d’évaluer tout effet sur la précision et la variabilité des mesures.
Quantification de la protéine BSA dans des tubes de microcentrifugation à l’aide d’un test AccuOrange. Aucune différence significative n’a été observée. Chaque concentration a été testée en 3 réplicats par condition.
Résultats
Les tubes reconditionnés ont permis d’obtenir des courbes standard comparables à celles obtenues avec des consommables neufs (Figure A). Les valeurs de R² sont restées supérieures à 0,96 dans les deux conditions, tant pour les tubes neufs (R² = 0,9604) que reconditionnés (R² = 0,9803). Aucune différence significative marquée n’a été détectée au niveau du signal pour aucune des concentrations (Figure B). La marque Low-binding (M1) n’a montré aucun avantage détectable aux faibles concentrations.
Les écarts et les coefficients de variation ont légèrement varié d’un réplicat à l’autre, mais sans tendance constante en faveur de l’un ou l’autre groupe, ce qui suggère que la variation observée reflète des facteurs expérimentaux normaux comme la préparation des dilutions, le pipetage et le moment de la mesure, plutôt qu’un effet du reconditionnement. Aux concentrations les plus basses, la variabilité est dominée par le bruit instrumental à l’approche de la limite de détection du kit, et non par un phénomène d’adsorption dépendant de la concentration.
Ces résultats confirment que les tubes de microcentrifugation reconditionnés peuvent être réutilisés pour les manipulations de faibles concentrations de protéines, sans perte de précision ni de fiabilité.