Validation du processus de reconditionnement - tubes de 1,5 ml utilisés pour la PCR
Des tubes de 1,5 ml neufs et reconditionnés ont été utilisés pour s’assurer qu’ils conservent leur intégrité tout au long du processus de reconditionnement.
Le mélange de réaction PCR pour pGFP-actine a été préparé dans 10 tubes différents de 1,5 ml. Le contenu de 5 d’entre eux est ensuite transféré dans 5 tubes PCR. Après la PCR, un tampon de chargement est ajouté aux tubes PCR et les échantillons sont placés dans les premiers puits n°2-6 d’un gel d’agarose.
Les dix tubes de 1,5 ml sont nettoyés et séchés selon notre processus de reconditionnement. Cinq d’entre eux sont ensuite réutilisés pour préparer un mélange de réaction PCR pour la pGFP-actine et les cinq autres sont utilisés comme contrôles négatifs pour la même réaction (contenant tous les réactifs à l’exception de la pGFP-actine). Leur contenu est ensuite transféré dans 10 tubes PCR. Après la PCR, un tampon de chargement est ajouté aux tubes PCR et les échantillons sont placés dans les puits n°7-11 d’un gel d’agarose (processus avec pGFP-actine) et les puits n°13-17 (contrôles négatifs avec des tubes reconditionnés). Le puits n°12 contient un contrôle négatif préparé dans un nouveau tube de 1,5 ml et agit comme un véritable contrôle négatif. Le puits n°1 contient le marqueur de poids moléculaire.
Cette expérience nous a permis de tester la présence d’ADN résiduel.
Résultats
Tous les tubes reconditionnés n'ont produit aucun signal dans leurs puits respectifs, ce qui indique qu'ils ne contenaient pas d'ADN résiduel.
Conclusion
Notre processus de reconditionnement a fonctionné de manière à ce que les consommables lavés et séchés puissent être utilisés plusieurs fois dans le département de biologie moléculaire.
